Η μελέτη της χρώσης μυελοϋπεροξειδάσης ενισχύει τη διάγνωση των αιματολογικών παθήσεων

Η χρώση μυελοϋπεροξειδάσης (MPO), γνωστή και ως χρώση λευκοκυτταρικής υπεροξειδάσης (POX), είναι μια ευρέως χρησιμοποιούμενη κυτταροχημική μέθοδος χρώσης. Χρησιμοποιείται κυρίως για τη χρώση κυττάρων μυελού των οστών και επιχρισμάτων αίματος, αυτή η τεχνική ανιχνεύει την ενδοκυτταρική δραστηριότητα υπεροξειδάσης για να βοηθήσει στη διάγνωση αιματολογικών διαταραχών, ιδιαίτερα στην ταξινόμηση της λευχαιμίας.

Η χρώση MPO βασίζεται στην καταλυτική αντίδραση της ενδοκυτταρικής υπεροξειδάσης. Αυτό το ένζυμο διασπά τα οξείδια για να παράγει οξυγόνο, το οποίο στη συνέχεια αντιδρά με ιωδιούχο κάλιο για να σχηματίσει ιώδιο. Το ιώδιο συνδυάζεται με τη χρωστική Wright-Giemsa, δημιουργώντας χρωματισμένους κόκκους στο κυτταρόπλασμα που αποκαλύπτουν την κατανομή της υπεροξειδάσης υπό μικροσκόπιο. Διαφορετικοί τύποι κυττάρων παρουσιάζουν διαφορετικές περιεκτικότητες και μοτίβα κατανομής υπεροξειδάσης, επιτρέποντας τη χρώση MPO να τα διακρίνει.

Η τυπική χρώση MPO απαιτεί εξειδικευμένα κιτ αντιδραστηρίων για να διασφαλιστεί η ακρίβεια και η αξιοπιστία. Ένα τυπικό κιτ περιέχει:

• Διάλυμα Α: Διάλυμα ηωσίνης - Μια όξινη χρωστική ουσία που χρωματίζει το κυτταρόπλασμα κόκκινο ή ροζ
• Διάλυμα Β: Azure II - Μια βασική χρωστική ουσία που χρωματίζει τους πυρήνες μπλε ή μωβ
• Διάλυμα Γ: Ρυθμιστικό διάλυμα φωσφορικού άλατος ιωδιούχου καλίου (PBS) - Περιέχει το υπόστρωμα αντίδρασης υπεροξειδάσης και διατηρεί τη σταθερότητα του pH
• Διάλυμα Δ: Χρώση Wright-Giemsa - Μια χρωστική διπλής χρήσης που ενισχύει τη μορφολογία των κυττάρων

Τα κιτ διατίθενται σε διάφορα μεγέθη (διαμορφώσεις 5-δοκιμών, 20-δοκιμών και 100-δοκιμών) για να καλύψουν διαφορετικές εργαστηριακές ανάγκες.

1. Προετοιμασία διαλύματος εργασίας: Ανακατέψτε το Διάλυμα Γ με το Διάλυμα Δ (τυπικά αναλογία 1,0 ml:250µl). Χρησιμοποιήστε το εντός δύο ωρών.
2. Στερέωση επιχρίσματος: Στερεώστε τα προετοιμασμένα επιχρίσματα μυελού των οστών ή αίματος με μεθανόλη ή αιθανόλη για 5-10 λεπτά.
3. Χρώση: Βυθίστε τα στερεωμένα επιχρίσματα στο διάλυμα εργασίας για 5-10 λεπτά, ελέγχοντας τη θερμοκρασία και την υγρασία.
4. Ξέπλυμα: Ξεπλύνετε απαλά με απεσταγμένο νερό ή ρυθμιστικό διάλυμα PBS για να αφαιρέσετε την περίσσεια χρώσης.
5. Αντιχρωματισμός(προαιρετικό): Χρησιμοποιήστε αιματοξυλίνη για να ενισχύσετε την αντίθεση των πυρήνων.
6. Στέγνωμα: Στεγνώστε στον αέρα ή χρησιμοποιήστε πιστολάκι μαλλιών.
7. Μικροσκοπία: Εξετάστε τα χρωματισμένα επιχρίσματα για να αξιολογήσετε τη δραστηριότητα και την κατανομή της υπεροξειδάσης.

Η ερμηνεία των αποτελεσμάτων απαιτεί εξειδικευμένη εμπειρογνωμοσύνη. Τα κοινά ευρήματα περιλαμβάνουν:

• Θετική αντίδραση: Κόκκινοι-καφέ έως σκούροι μπλε κυτταροπλασματικοί κόκκοι (ασθενής έναντι ισχυρής θετικότητας). Οι κόκκοι μπορεί να καλύπτουν ολόκληρο το κυτταρόπλασμα ή να αποκρύπτουν τον πυρήνα.
• Αρνητική αντίδραση: Μπλε κυτταρόπλασμα χωρίς κόκκους και ομοιόμορφα μωβ-κόκκινοι πυρήνες.
• Ηωσινόφιλα: Εμφανίζουν έντονη σκούρα μπλε χρώση, μερικές φορές με εξωκυτταρικούς κρυστάλλους που μοιάζουν με βελόνες.

• Ταξινόμηση λευχαιμίας: Διακρίνει τη μυελοειδή (MPO-θετική) από τη λεμφοειδή (MPO-αρνητική) λευχαιμία, καθοδηγώντας τις αποφάσεις θεραπείας.
• Διάγνωση οξείας μυελοειδούς λευχαιμίας (AML): Επιβεβαιώνει τη μυελοειδή προέλευση και βοηθά στην υποτυποποίηση, με ποικίλα ποσοστά θετικότητας που υποδεικνύουν διαφορετικούς υποτύπους AML.
• Αξιολόγηση μυελοδυσπλαστικού συνδρόμου (MDS): Αξιολογεί την κυτταρική ωρίμανση και διαφοροποίηση, με μη φυσιολογικά πρότυπα MPO που υποδηλώνουν MDS.
• Άλλες αιματολογικές διαταραχές: Χρήσιμο στη διάγνωση χρόνιας μυελοειδούς λευχαιμίας και μυελοΐνωσης.

• Ποιότητα αντιδραστηρίων και συνθήκες αποθήκευσης
• Αυστηρή τήρηση του πρωτοκόλλου
• Σωστή προετοιμασία επιχρίσματος
• Βέλτιστη διάρκεια χρώσης
• Ειδική μικροσκοπική αξιολόγηση από παθολόγους

Οι τεχνολογικές εξελίξεις συνεχίζουν να βελτιώνουν τη χρώση MPO. Η ανοσοϊστοχημεία συνδυάζει πλέον την MPO με ανοσολογικούς δείκτες για μεγαλύτερη ακρίβεια, ενώ η κυτταρομετρία ροής επιτρέπει την ποσοτική ανίχνευση MPO. Καθώς αυτή η κλασική κυτταροχημική μέθοδος εξελίσσεται, υπόσχεται να προσφέρει ακόμη μεγαλύτερες συνεισφορές στη διάγνωση και τη θεραπεία των αιματολογικών παθήσεων.